一、暗视野显微镜检查 取硬下疳、二期梅毒疹的丘疹、扁平湿疣及粘膜斑上的螺旋体进行病原学检查，如标本中看到螺旋体，其形态与运动符合梅毒螺旋体特征时，结果即为阳性。但如果在口腔粘膜取材，要注意与口腔腐生螺旋体相鉴别。若阴性，不能除外此诊断。 二、直接荧光抗体检查 采用直接荧光抗体法（DFA-TP）对分泌物进行梅毒螺旋体检查。可排除其它螺旋体，特别是口腔腐生螺旋体的干扰。对确诊 一、二期梅毒及复发梅毒十分重要。但是阴性结果不能排除梅毒。 三、血清学检查 梅毒血清学检查包括非特异性螺旋体抗体和特异性螺旋体抗体检测。
